Seti Mpya ya Kugundua Asidi ya Nyuklia ya Virusi vya Korona(SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flumadiniscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Kifaa Kipya cha Kugundua Virusi vya Korona(SARS-Cov-2) (Njia ya Uchunguzi ya Fluorescent RT-PCR)
【Packaging specifications 】Vipimo 25/Kiti
【Intended usumri】
Seti hii hutumika kutambua ubora wa asidi ya nucleic kutoka kwa coronavirus mpya katika swabs za nasopharyngeal, swabs za oropharyngeal (koo), pamba za mbele za pua, pamba za katikati ya turbinate, kuosha pua na aspirates ya pua kutoka kwa watu ambao wanashukiwa kuwa na COVID19 na mtoaji wao wa huduma ya afya. Ugunduzi wa jeni za ORF1ab na N za coronavirus mpya unaweza kutumika kwa utambuzi msaidizi na ufuatiliaji wa magonjwa ya maambukizo mapya ya coronavirus.
【Principles of the procedure 】
Seti hii imeundwa kwa ajili ya uchunguzi mahususi wa TaqMan na vianzio mahususi vilivyoundwa kwa ajili ya mfululizo mpya wa virusi vya corona (SARS-Cov-2) ORF1ab na N. Suluhisho la mmenyuko wa PCR lina seti 3 za vianzio mahususi na vichunguzi vya umeme kwa ugunduzi mahususi wa shabaha, na seti ya ziada ya vianzio mahususi na vichunguzi vya umeme hutumika kama udhibiti wa ndani wa kiwango cha kifaa cha kugundua jeni za utunzaji wa nyumbani.
Kanuni ya mtihani ni kwamba uchunguzi maalum wa umeme huchujwa na kuharibiwa na shughuli ya exonuclease ya enzyme ya Taq katika mmenyuko wa PCR, ili kikundi cha fluorescent cha mwandishi na kikundi cha fluorescent kilichozimwa kitenganishwe, ili mfumo wa ufuatiliaji wa fluorescence uweze kupokea fluorescent. ishara, na kisha Kupitia athari ya uboreshaji wa ukuzaji wa PCR, ishara ya fluorescence ya uchunguzi hufikia thamani ya kizingiti iliyowekwa-Ct thamani (Kizingiti cha mzunguko). Katika kesi ya hakuna amplicon inayolengwa, kikundi cha waandishi wa probe kiko karibu na kikundi cha kuzima. Kwa wakati huu, uhamisho wa nishati ya resonance ya fluorescence hutokea, na fluorescence ya kikundi cha mwandishi huzimishwa na kikundi cha kuzima, ili ishara ya fluorescent haiwezi kugunduliwa na chombo cha PCR cha fluorescent.
Ili kufuatilia matumizi ya vitendanishi wakati wa mtihani, kit ina vifaa vya udhibiti vyema na hasi: udhibiti mzuri una plasmid ya recombinant ya tovuti inayolengwa, na udhibiti hasi ni maji ya distilled, ambayo hutumiwa kufuatilia uchafuzi wa mazingira. Inashauriwa kuweka udhibiti mzuri na udhibiti hasi wakati huo huo wakati wa kupima.
【Main componenits 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Mchanganyikoents | |
Name | Maalumuthibitisho | Kiasiity | Kiasiity | |
Udhibiti mzuri | 180 μL / bakuli | 1 | 1 | Plasmidi zilizotengenezwa kwa njia bandia, Maji yaliyosafishwa |
Udhibiti hasi | 180 μL / bakuli | 1 | 1 | Maji yaliyosafishwa |
Mchanganyiko wa SARS-Cov-2 | 358.5 μL/kichungi | 1 | / | Jozi mahususi za viingilio, vichunguzi mahususi vya kugundua umeme, dNTP, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, maji yaliyosafishwa, n.k. |
Mchanganyiko wa Enzyme | 16.5 μL / bakuli | 1 | / | Vimeng'enya vya Taq, reverse transcriptase, vimeng'enya vya UNG, n.k. |
Mchanganyiko wa SARS-Cov-2(Lyophilised) | Vipimo 25 / bakuli | / | 1 | Jozi mahususi za vitangulizi, vichunguzi mahususi vya kugundua umeme, dNTP, vimeng'enya vya Taq, transcriptase ya reverse, maji yaliyosafishwa n.k. |
2x Buffer | 375 μL / bakuli | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Maji yaliyochujwa, nk. |
Kumbuka:( 1) Vipengee katika seti tofauti za batch haziwezi kuchanganywa au kubadilishana.
(2) Andaa kitendanishi chako mwenyewe: Seti ya uchimbaji wa asidi ya nyuklia.
【Storage conditions na expiration date 】
For BST-SARS-25:Usafiri na uhifadhi kwa -20±5℃ kwa muda mrefu.
For BST-SARS-DR-25:Usafiri kwa joto la kawaida. Hifadhi kwa -20±5℃ kwa muda mrefu.
Epuka mizunguko ya kufungia mara kwa mara. Muda wa uhalali umewekwa kwa muda wa miezi 12.
Tazama lebo ya tarehe ya utengenezaji na matumizi.
Baada ya kufunguliwa kwa mara ya kwanza, kitendanishi kinaweza kuhifadhiwa kwa -20 ± 5 ° C kwa si zaidi ya mwezi 1 au hadi mwisho wa kipindi cha reagent, tarehe yoyote inakuja kwanza, ili kuepuka mzunguko wa kufungia mara kwa mara, na idadi ya kufungia kwa reagent. -mizunguko ya thaw haipaswi kuzidi mara 6.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Aina ya sampuli inayotumika: Suluhisho la asidi ya nucleic iliyotolewa.
2.Uhifadhi na usafirishaji wa sampuli: Hifadhi kwa-20±5℃kwa miezi 6. Igandishe na kuyeyusha sampuli si zaidi ya mara 6.
【Testing methodi】
1.Nucleic acid extraction
Chagua kisanduku kinachofaa cha uchimbaji wa asidi ya nuklei ili kutoa asidi ya nukleiki ya virusi, na ufuate maagizo yanayolingana. Inapendekezwa kutumia zana ya kuchubua na kusafisha asidi ya Nucleic inayozalishwa na Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. au vifaa sawa vya kusafisha asidi ya nukleiki.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
( 1) Ondoa Mchanganyiko wa SARS-Cov-2 na Mchanganyiko wa Enzyme, kuyeyuka kabisa kwenye joto la kawaida changanya vizuri na kifaa cha Vortex na kisha centrifuge kwa muda mfupi.
(2) Mchanganyiko wa Enzyme wa 16.5uL uliongezwa kwa Mchanganyiko wa 358.5uL SARS-Cov-2 na kuchanganywa vizuri ili kupata mchanganyiko wa mmenyuko.
(3) Andaa bomba la octal la PCR la mililita 0.2 na utie alama kwa 15uL ya myeyusho uliochanganyika wa hapo juu kwa kila kisima.
(4) Ongeza 15 μL ya mmumunyo wa asidi ya nukleiki iliyosafishwa, udhibiti chanya na udhibiti hasi, na funika kwa uangalifu kifuniko cha mirija ya oktali.
(5) Changanya vizuri kwa kugeuza kichwa chini, na kwa haraka centrifuge ili kulimbikiza kioevu chini ya bomba.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Ongeza 375ul 2x Buffer kwa SARS-Cov-2 Mix((Lyophilised) ili kuandaa mchanganyiko wa majibu. Changanya vizuri kwa kupiga bomba na kisha centrifuge kwa muda mfupi. (Mchanganyiko wa athari ukishatayarishwa, inashauriwa kuhifadhiwa kwa -20℃ uhifadhi wa muda mrefu.)
(2) Andaa bomba la octal la 0.2 mL la PCR na utie alama kwa 15μL ya mchanganyiko wa majibu kwa kila kisima.
(3) Ongeza 15μL ya mmumunyo wa asidi ya nukleiki iliyosafishwa, udhibiti chanya na udhibiti hasi, na funika kwa uangalifu kifuniko cha mirija ya oktali.
(4) Changanya vizuri kwa kugeuza kichwa chini, na kwa haraka centrifuge ili kuzingatia kioevu chini ya bomba.
3. PCR amplification (Tafadhali rejelea mwongozo wa chombo kwa mipangilio ya uendeshaji.)
3. 1 Weka PCR 8-tube ndani ya chumba cha sampuli ya chombo cha umeme cha PCR, na uweke sampuli ya kupimwa, udhibiti mzuri na udhibiti hasi kulingana na utaratibu wa upakiaji.
3.2 Mkondo wa utambuzi wa Fluorescence:
( 1) Jeni la ORF1ab huchagua njia ya utambuzi ya FAM (Mtangazaji: FAM, Quencher: Hakuna).
(2) Jeni ya N huchagua njia ya kutambua ya VIC (Mtangazaji: VIC, Quencher: Hakuna).
(3) Jeni ya kawaida ya ndani huchagua njia ya utambuzi ya CY5 (Mtangazaji: CY5, Quencher: Hakuna).
(4) Rejea ya Passive imewekwa kuwa ROX.
3.3 Mpangilio wa kigezo cha programu ya PCR:
Hatua | Halijoto(℃) | Muda | Idadi ya mizunguko | |
1 | Badilisha majibu ya unukuzi | 50 | Dakika 15 | 1 |
2 | Uanzishaji wa enzyme ya Taq | 95 | Dakika 2.5 | 1 |
3 | Uanzishaji wa enzyme ya Taq | 93 | 10 s | 43 |
Upanuzi wa upanuzi na upatikanaji wa fluorescence | 55 | 30 s |
Baada ya kuweka, hifadhi faili na endesha programu ya majibu..
4.Results analysis
Baada ya programu kumalizika, matokeo huhifadhiwa kiatomati, na curve ya ukuzaji inachambuliwa. Curve ya ukuzaji imewekwa kwa kizingiti chaguo-msingi cha chombo.
【Explanation of test results 】
1. Bainisha uhalali wa jaribio: Kidhibiti chanya cha FAM, kituo cha VIC kinapaswa kuwa na mkunjo wa kawaida wa ukuzaji, na thamani ya Ct kwa ujumla ni chini ya 34, lakini inaweza kubadilika kutokana na mipangilio tofauti ya vizingiti vya ala tofauti. Kidhibiti hasi cha FAM, chaneli ya VIC lazima kiwe Ct isiyoimarishwa. Inakubaliwa kuwa mahitaji ya hapo juu lazima yatimizwe kwa wakati mmoja, vinginevyo mtihani huu ni batili.
2. Hukumu ya matokeo
Kituo cha FAM/VIC | Matokeo ya hukumu |
Ct<37 | Mtihani wa sampuli ni chanya |
37≤Ct<40 | Curve ya ukuzaji ina umbo la S, na sampuli zinazotiliwa shaka zinahitaji kuchunguzwa upya; ikiwa matokeo ya uchunguzi upya ni thabiti, inahukumiwa kuwa chanya, vinginevyo ni hasi |
Ct≥40 Au Hakuna Ukuzaji | Jaribio la sampuli ni hasi (au chini ya kikomo cha chini cha utambuzi wa vifaa) |
Kumbuka: ( 1) Ikiwa chaneli ya FAM na chaneli ya VIC ni chanya kwa wakati mmoja, SARS-Cov-2 imedhamiriwa kuwa chanya.
(2) Ikiwa chaneli ya FAM au chaneli ya VIC ni chanya na chaneli nyingine ni hasi, jaribio linapaswa kurudiwa. Ikiwa ni chanya kwa wakati mmoja, itahukumiwa kuwa chanya ya SARS-Cov-2, vinginevyo itahukumiwa kuwa hasi ya SARS-Cov-2.